隨著秋冬季的來臨，豬場腹瀉問題也變得逐漸嚴重。引起豬群腹瀉的原因有很多種，除了飼養(yǎng)管理（欄舍潮濕、溫度變化和斷奶轉群等）和飼料原因導致的非傳染病因素外。還有寄生蟲、細菌性和病毒性傳染病因素導致的豬群腹瀉。其中，絕大部分腹瀉問題主要是由豬性腹瀉相關病毒感染引起，這個結論也可從各實驗室的腹瀉樣本檢測數(shù)據(jù)得到佐證。特別是2010 年以來由 PEDV變異株所致的仔豬腹瀉及2014年發(fā)現(xiàn)的致病性PDCoV，使我國養(yǎng)豬業(yè)面臨新的威脅和挑戰(zhàn)，如何利用實驗室檢測輔助手段防控秋冬季病毒性腹瀉是當前關注的熱點。

一、什么是豬病毒性腹瀉？

二、國內(nèi)豬病毒性腹瀉流行情況

由于非瘟疫情壓力，養(yǎng)殖企業(yè)對于生物安全非常重視，認為各種洗消措施執(zhí)行的非常到位，但是有些舉措可以很好的防控非瘟，不一定能防控得住病毒性腹瀉，與ASFV主要以接觸傳播不同，PEDV傳播速度更快，腹瀉豬只排毒量大，且PEDV可以通過氣溶膠的方式遠距離傳播，這也提示我們要關注不同病原的生物學特性。通過對國內(nèi)不同省市公布的流行病學調(diào)查數(shù)據(jù)來看，豬病毒性腹瀉有一定的季節(jié)性，多以冬春季節(jié)多發(fā)，夏季也時有出現(xiàn)。以PEDV感染為主，呈普遍流行，2010年10月以后，國內(nèi)發(fā)生了一系列大規(guī)模的PEDV疫情，造成了巨大的經(jīng)濟損失。這些暴發(fā)是由新出現(xiàn)的傳播力極強的非SINDEL毒株引起的，新生仔豬的死亡率達到50-100%。隨后也發(fā)現(xiàn)了新的SINDEL毒株，證明經(jīng)典毒株和原來疫苗保護不了的變異株在國內(nèi)共同流行。

很多豬企對豬病毒性腹瀉的認知依然停留在PEDV上，對于其他腹瀉病毒缺少關注，但是近幾年的監(jiān)測數(shù)據(jù)表明，其他病毒單獨或者混合感染引起性腹瀉病例也逐漸增加。PDCoV雖然出現(xiàn)時間較晚，但研究表明該病毒具有比PEDV更廣泛的組織嗜性，以及細胞的感染譜，有更大的人畜共患的潛在風險，危害不容小覷，且該病還能和PEDV共同出現(xiàn)加重臨床癥狀，也應作為重點監(jiān)測防控疫病；PoRV在部分地區(qū)流行，近年來感染率也在逐漸增加；TGEV致病性低于PEDV主要呈現(xiàn)散發(fā)流行態(tài)勢，但因臨床癥狀與PEDV有相似，易造成診斷的混淆，影響豬場防控策略的制定和執(zhí)行。

目前豬群感染狀況不僅僅是單一病毒感染，很多豬群出現(xiàn)了二重甚至三重感染的情況，主要以與PEDV混合感染的方式出現(xiàn)，以PEDV/PoRV、PEDV/PDCoV、PEDV/TGEV和PEDV/PoRV/TGEV這幾種混感組合較多，當出現(xiàn)混合感染時，對豬群的致死性更強，也更難處理。由于RNA冠狀病毒的變異能力較強，病毒的基因組也在不斷發(fā)生著變異，如TGEV發(fā)生突變，形成一種能夠感染呼吸道的新毒株PRCV。在歐洲出現(xiàn)了PEDV/TGEV致病性重組的變種毒株（豬腸道冠狀病毒，SeCoV），目前僅在德國意大利和斯洛文尼亞有報道，但其致病性、臨床危害以及交叉保護等更多細節(jié)信息尚不清楚。以上出現(xiàn)的種種變化，對病原的診斷和防治要求也越來越高，也給豬場生產(chǎn)帶來了巨大的壓力。

三、明日達科技豬病毒性腹瀉檢測方案及產(chǎn)品優(yōu)勢

明日達病毒性腹瀉防控方案

相對于病毒分離法、熒光抗體檢測、免疫組織化學法、常規(guī)RT-PCR檢測和膠體金檢測，多重RT-PCR方法有著顯著優(yōu)勢：① 敏感性非常高，可以做到半定量；② 能確診單一感染或混合感染, 達到診斷和鑒別的雙重目的;③ 比傳統(tǒng)檢測方法更快速、方便，更能貼近一線生產(chǎn)。

根據(jù)不同地區(qū)豬病毒性腹瀉流行狀況及客戶自身設備限制因素，我們?yōu)椴煌枨罂蛻籼峁┎煌目茖W精準的檢測服務方案：

• 方案一、PEDV/TGEV/PoRV三重RT-PCR檢測試劑盒+ PDCoV單重RT-PCR試劑盒

• 方案二、PEDV/TGEV/PDCoV三重RT-PCR檢測試劑盒+PoRV單重RT-PCR試劑盒

• 方案三、PEDV+TGEV+PDCoV+PoRV單重RT-PCR試劑盒

• 方案四、可為大型客戶提供定制豬病毒性腹瀉RT-PCR試劑盒產(chǎn)品

產(chǎn)品優(yōu)勢

①  操作簡單、多項目同步進行

提供2種方案：

如果實驗室擁有4通道及以上PCR儀器，可以直接選擇腹瀉類多重PCR產(chǎn)品進行檢測

● 多重PCR產(chǎn)品：單孔可做多個病毒性腹瀉病原檢測項目

以PEDV/TGEV/PoRV三重RT-PCR檢測試劑盒為例，擴增曲線如下圖（2）所示：

圖2、PEDV/TGEV/PoRV三重RT-PCR擴增曲線

如果實驗室擁有4通道以下PCR儀器，可以選擇空間單重產(chǎn)品

● 多重PCR產(chǎn)品（空間單重）：由空間單重PCR產(chǎn)品形成多重優(yōu)勢。明日達產(chǎn)品多個檢測項目，運行程序全部一致。一臺儀器一個程序一次運行即可檢測多個疾病！

酶與PCR反應液為兩管設計（當前產(chǎn)品），減少因操作導致的誤差

即將推出一管式高度預混液，只需分裝加樣即可上機檢測，讓操作更簡便，敬請期待！

擁有高活性反轉錄體系，10min即可完成反轉錄步驟，搭配明日達自主研發(fā)15min磁珠自動化提取，從提取到檢測全流程僅需90min。

②  特異性強

明日達腹瀉類試劑盒能夠特異性擴增PEDV、TGEV、PoRV以及PDCoV靶標，相互之間無交叉反應；同時對CSFV、PPRSV、PCV2等十幾種其他豬病無交叉反應。

以PEDV/TGEV/PoRV三重RT-PCR檢測試劑盒為例：

⑴ 用設定的多重RT-PCR反應條件對PEDV、TGEV和PoRV標準品進行單獨或者兩兩混合檢測：

⑵ 用設定的多重RT-PCR反應條件對PEDV、TGEV、PoRV、PCV2、CSFV和PRRSV標準品進行檢測，結果如下圖（9）所示：

圖9、加入PEDV、TGEV、PoRV、PCV2、CSFV和PRRSV

③  敏感性和重復性好

將內(nèi)部核酸質控品稀釋到 100copies/μL， 10copies/μL， 1copies/μL，0.1copies/μL，共計 4 個梯度， 每個梯度做 24 個平行檢測， 計算每個梯度的檢出率，平均 Ct 值和變異系數(shù)（CV%）。

以PEDV/TGEV/PoRV三重RT-PCR檢測試劑盒為例（表1）：

表1 敏感性和重復性實驗

從結果可知，PEDV/TGEV/PoRV三重RT-PCR最低檢測限為1copies/μL， 所有梯度的檢測CV%均在2%以下，說明該產(chǎn)品具有良好的敏感性，特異性和穩(wěn)定性。

結 語

隨著腹瀉病毒自身不斷變異重組，致病因素也逐漸增多，豬場獸醫(yī)工作者對豬只的混合感染的認識不夠，沒有很好的鑒別手段，就有可能給腹瀉病的診治帶來誤導，錯過了診治的黃金期，給豬場帶來巨大經(jīng)濟損失。由于近幾年全行業(yè)養(yǎng)殖水平的提高，中大型甚至是小型豬企都樹立了疫病防控的先進理念，也有的建立了能為自己豬場服務的高水平實驗室檢測體系，從而針對復雜的問題，能夠迅速剝繭抽絲，找出主要問題所在，從而將損失最小化。明日達科技提供的豬病毒性腹瀉多種RT-PCR解決方案操作上更便捷、方法精準科學、產(chǎn)品敏感性特異性好，可為更多豬場解決診斷難題。